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		細(xì)胞內(nèi)的流式細(xì)胞術(shù)方式轉(zhuǎn)錄因子和相關(guān)蛋白的

　　細(xì)胞內(nèi)的流式細(xì)胞術(shù)方式于異質(zhì)性的細(xì)胞群的轉(zhuǎn)錄因子和相關(guān)蛋白的檢測。同時分析多個標(biāo)記允許沿著一個特定的分化途徑的細(xì)胞的關(guān)鍵時間點，標(biāo)記，和頻率的確定。轉(zhuǎn)錄因子是DNA和其他蛋白質(zhì)結(jié)合，調(diào)節(jié)基因表達(dá)的蛋白質(zhì)。他們發(fā)揮關(guān)鍵作用，在細(xì)胞發(fā)育和分化。例子包括FOXP3 Treg細(xì)胞分化為明確的內(nèi)胚層和Sox17。

　　FOXP3被認(rèn)為是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的主控調(diào)節(jié)。許多轉(zhuǎn)錄因子一樣，F(xiàn)oxP3的數(shù)以千計的基因結(jié)合，從而在向上或向下調(diào)節(jié)的基因表達(dá)所必需的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能。1 SATB1基因組組織者，F(xiàn)oxP3的壓抑，防止T-效應(yīng)的細(xì)胞因子的誘導(dǎo)，包括IL-4和IFN-γ。

　　同樣，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色，轉(zhuǎn)錄因子檢測用流式細(xì)胞儀需要細(xì)胞的固定和通透。通常位于細(xì)胞核DNA和其他蛋白質(zhì)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子。根據(jù)對目標(biāo)分子的抗原決定簇，不同的固定和通透緩沖的性質(zhì)可能是必要的。

　　的固定和透化細(xì)胞可侵入細(xì)胞表面標(biāo)志物的染色，這使得相容的緩沖液的選擇更關(guān)鍵。為了進(jìn)一步便于轉(zhuǎn)錄因子檢測，屋宇署已開發(fā)了BD Pharmingen公司轉(zhuǎn)錄因子的緩沖集。該緩沖系統(tǒng)是強(qiáng)大到足以允許訪問大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)抗原，同時保持大部分的細(xì)胞表面標(biāo)志物的可檢測性。

　　Tregs的人體細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測。人類調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測人外周血單核細(xì)胞表面標(biāo)記，使用下面的熒光抗體染色：CD4 + CD25 FITC，艷紫421，CD127的Alexa Fluor?647。洗滌后，將細(xì)胞固定，透BD Pharmingen公司的轉(zhuǎn)錄因子的緩沖液設(shè)置。然后將細(xì)胞在細(xì)胞內(nèi)染色與FoxP3的PE-CF594，洗滌，并配備了一臺PE-CF594可選的過濾器的反射鏡單元上BD FACSVerse的流式細(xì)胞儀獲得的。封閉式的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（藍(lán)色）有CD4 + CD25 高 CD127 暗淡 FOXP3 +表型。

　　干細(xì)胞分化的研究便利套件作為多能性干細(xì)胞分化成不同的細(xì)胞類型，表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子和其他蛋白的變化。在哺乳動物的胚胎發(fā)育，明確的內(nèi)胚層產(chǎn)生的肝臟，胰腺和小腸。3-5在指定為最終的內(nèi)胚層，水平的轉(zhuǎn)錄因子SOX17和FOXA2的細(xì)胞表面標(biāo)志物CD184（CXCR4）增加，而多能性的標(biāo)記，如Nanog和Sox2的減少。

　　多色流式細(xì)胞儀是一個極好的方法，用于確定標(biāo)記感興趣的細(xì)胞表達(dá)的相對數(shù)。這是有用的，為研究細(xì)胞分化途徑分化協(xié)議和不同的細(xì)胞的分化潛能的優(yōu)化，量化，和比較，專門為..

　　為了方便轉(zhuǎn)錄因子在干細(xì)胞研究，屋宇署已開發(fā)了幾個關(guān)鍵的干細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，包括BD莖流?人類多能干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒（貨號：560589），BD莖流檢測試劑盒?鼠標(biāo)多能干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子分析試劑盒（貨號：560585），BD莖流?人類神經(jīng)細(xì)胞譜系分析試劑盒（貨號：561526），以及BD莖流?人類明確和胰腺內(nèi)胚層分析試劑盒（目錄第562496號）。這些套件包含優(yōu)化的抗體和緩沖體系來表征多能性干細(xì)胞，并允許跟蹤的多能性干細(xì)胞的分化成各自的譜系。

　　Tregs的人體細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測。明確的內(nèi)胚層分化的H9人類胚胎干細(xì)胞H9的人類胚胎干細(xì)胞（hESCs）（WiCell，麥迪遜，威斯康星州）三天在德愛慕等6分化的細(xì)胞進(jìn)行了分析流式細(xì)胞儀使用組件的BD莖流人類最終的協(xié)議明確的內(nèi)胚層分化和胰腺內(nèi)胚層分析試劑盒和CD184 PE。隨著細(xì)胞分化的多能性標(biāo)志物Nanog的水平降低，并增加了明確的內(nèi)胚層標(biāo)志物水平的SOX17（綠色）和CD184。流式細(xì)胞術(shù)的BD?LSR II流式細(xì)胞儀系統(tǒng)。

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