|
(1)定義薄層色譜，或稱薄層層析，薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板(常用玻璃板，也可用滌綸布等)上形成薄層，然后用相應的溶劑進行展開。從而對混合樣品進行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術。
(2)分類薄層層析可根據作為固定相的的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
(3)方法的優缺點
①優點：操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20min；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有
0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。
②缺點：對生物高分子的分離效果不甚理想。
(3)操作步驟
①薄層板制備：除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩地移動涂布器進行涂布(厚度為
0.2～O.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30min，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
②點樣：除另有規定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.Ocm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
③展開：展開室如需預先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂的蓋，使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.Ocm(切勿將樣點浸入展開劑中)，密封室蓋，待展開至規定距離(一般為10-15cm)，取出薄層板，晾干，按各品種項下的規定檢測。
④顯色：取出的薄層板，立即噴灑顯色劑，使其顯色，計算Rf值或使之出現各種有色的斑點，與標準進行對照比較，可確定其成分。
|
