|
NMR是測定分子結構的最有效的方法之一，具有簡單、準確、專一性高和不破壞樣品等特點。不僅已被用以定量測定大量的藥理活性藥物，還能區分及定量測定一些藥物的立體異構體。表明此方法作為一種藥物的定量方法具有簡單易行、結果準確的優點，還可用做某些沒有對照品的藥物定量方法的補充。
NMR與HPLC、GC、SFE、SFC、GPC、CE等的聯用使快速高效分離與強有力結構分析有機的結合。而HPLC與NMR的聯用設想則早始于20世紀70年代，80年代初布魯克公司就以其領先世界的NMR技術為基礎，首先開發了LC／NMR技術。近年來，NMR和色譜法聯合使用的這一技術更為成熟，經過不斷改進和完善，全自動操作、常規使用的HPLC／NMR譜儀已遍及全世界。眾所周知，液相色譜是分離復雜混合物的最好方法，而NMR是結構分析強有力的工具，兩者聯用是科學家們長期以來的愿望。
典型的高效液相色譜與核磁共振聯用儀。液相色譜包括：HPLC自動進樣器，HPLC泵，色譜柱和恒溫箱，非NMR檢測器，如UV(紫外一可見)等。流動液從檢測器進入HPLC／NMR接口，接口中附設了用于中間存儲HPLC峰的環路(LOOP)，從HPLC／NMR接口出來引至帶流動池的NMR探頭或廢液收集器。通過探頭后，流動液進入餾分收集器回收，并進一步用各種NMR技術對各色譜峰進行研究。在HPLC與NMR接口處的分流器(splitter)上還可連接質譜儀，進一步成為LC—NMR／MS聯用儀。
HPLC／NMR的基本操作模式有連續流動模式(on - flow)、停流模式(stop—flow)和峰存貯模式(Peak parking or loop—collection)等三種。這三種模式各有特點，如連續流動模式的優點是一次分析可得到所有組分的NMR信息，缺點是所獲得的NMR圖譜質量較差；停流模式的優點是NMR譜圖質量較好，缺點是存在明顯的峰展寬，而且分析時間較長；峰存貯模式的特點是色譜峰被收集并暫時貯存到不同的毛細管回路內，由NMR譜儀逐一測定各流分。實際操作時，根據樣品的特性和檢測目的，可選擇采用何種操作模式。
采用HPLC／NMR方法可對雜質含量在9％水平的藥物雜質進行檢測，方法簡便、快速、準確。在藥物雜質檢測中，HPLC／MS測定和HPLC／NMR測定都是簡便、快速的方法，但HPLC／NMR聯用技術中NMR測定不受HPLC分離過程中使用的緩沖鹽溶液的限制，并可以提供大量的結構信息。因此，HPLC／NMR聯用技術是一種高效、快速獲得混合物中術知化合物結構信息的技術，它在藥物研究中的應用已日益廣泛。
|
