測定化學對照品純度的方法 對待測物質進行純度檢查所用的分析方法與該物質的用途相關。可將這些分析方法分為三大類: 需要與外部化學對照品進行比對的方法(比如色譜法或者分光光度法); 只依賴于物質固有動力學屬性的方法(比如相溶度分析法和差示掃描量熱法); 重要的是通過多個項目的檢測,確定化學對照品候選物質滿足其使用要求。
為確定候選物質是否滿足使用要求,對其進行標化的方法可分為2類:第1類是確定對照品候選物質結構的鑒別方法,第2類方法用于確定化學對照品的純度。如果不能確定對照品原料中的雜質及其含量,對于多數分析方法,都不能以百分純度的形式來表示該化學對照品的絕對量值。所以,標稱的純度就是根據各種分析方法的數據,對該物質真實量值的一個估計值。
確認化學對照品結構的方法 如果一個擬定對照品的化學結構已經非常確定,可以通過與權威物質紅外圖譜的比較來確認候選物質的結構。當該物質具有多晶型現象時,應特 別注意對紅外圖譜的影響[8] 。核磁共振圖譜、質譜或者X-射線衍射晶體學圖譜等高度專屬的技術可能也會用于相關圖譜的比較。如果準備用1個物質.
替代已經建立的具有相同分子組成的化學對照品必須對其結構進行確認,確保2個樣本的特性一致。 如果是出于上述目的,對于換批對照品,只要比較前后2批對照品的紅外吸收圖譜即可。但是,當沒有相應的權威樣本進行比較,缺乏該物質相關特性的權威數據時,就可能需要像新化合物的結構確證工作那樣,采用多種分析技術手段對化合物的結構進行確定。所用的技術可能包括元素分析、晶體學研究、質譜、核磁共振譜、官能團分析、紅外光譜和紫外光譜,根據需要可能還有其他的補充試驗,以便對擬定的標準物質進行全面的質量研究。
(1)你需要用三種不同展開劑對其進行薄層鑒別,并且至少有一種條件下其斑點足夠大到稍有拖尾,如果三次都只得到一個斑點,說明其基本為一純物質.
(2)液相測定,同樣需用三種不同流動相或檢測波長,如果有可能應盡可能做到主峰為平頭峰,扣除溶劑峰后,以歸一法計算含量.
具體的一種三萜酸A對照品為例吧。
1、首先是TLC驗證：
1.1 選擇三種不同的展開系統。要求：展開劑的種類不同，而且三種展開劑展開樣品的Rf值最好有較大的區別。我用的三個系統是二氯甲烷：丙酮：冰醋酸＝9:1:0.1，石油醚：丙酮：冰醋酸＝25:10:0.3, 正己烷：乙酸乙酯：冰醋酸＝10：10：0.2.硅膠應使用用GF254。
1.2 點樣。要求：用于點樣的溶液要用易揮發容積配制，盡量的濃，點樣量盡量的多，要保持展開后不脫尾。（點樣量要自己摸）
1.3 用以上三個系統分別展開。展開前要飽和。
1.4 觀察純度。在254nm 觀察除主斑點外有無其他暗斑點，如有為不純。在365nm觀察有無熒光斑點，如有為不純。使用通用顯色劑：如濃硫酸。觀察有無除主斑點外其他現色斑點，如有為不純。如果TLC鑒定為純品可進行下一項。
2、 HPLC檢測。
1.1 最好使用DAD檢測器，可以同時測定5個不同波長，測定波長最好覆蓋整個紫外－可見光區，我選擇的是210、254、330、360、400nm。我的樣品為白色，所以波長只到400nm，如果樣品有顏色波長可以更長。
1.2 HPLC 測定，我測了三次，都是用乙腈（A）：0.03％磷酸水（B)梯度洗脫。第一次：(A)5％-100%；0－60min，第二次：（A）15％－50％；0－40min，第三次：（A） 25％－40％；0－30min。
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